Descripción del título
Avaliação de protocolos de ...
Listeria monocytogenes is a pathogen transmitted by foods that can cause serious illness, especially in immunocompromised individuals. The rapid and accurate identification of these bacteria in foods is a great ally in preventing its transmission. The molecular methods have proven to be effective for that; however, is still difficult to determine the optimal DNA extraction technique based on the characteristics of each microorganism. The efficiency of PCR depends on satisfactory amounts and quality of DNA. This study aimed to evaluate two DNA extraction techniques, CTAB detergent and thermal lysis. Four strains of L. monocytogenes were used, one ATCC 19117 and three isolated industrial environment (thinning of a slaughterhouse), previously identified by conventional methods and confirmed by molecular methods. The extraction by thermal lysis showed satisfactory results, providing visualization of visible bands and without interfering in the PCR reaction. The thermal lysis proved to be an adequate extraction protocol, as well as providing the amounts and quality of DNA required for the amplification, being simple, fast and an inexpensive technique
Listeria monocytogenes é um patógeno transmitido por alimentos que pode causar sérias doenças, principalmente em indivíduos imunodeprimidos. A identificação rápida e precisa desta bactéria nos alimentos é uma grande aliada na prevenção da sua transmissão. Os métodos moleculares têm se mostrado efetivos no que se refere a estes quesitos, no entanto, ainda é difícil determinar a melhor técnica de extração do DNA em função das características de cada micro-organismo. A eficiência da PCR depende de DNA em quantidade e qualidade satisfatórios. O presente trabalho teve por objetivo avaliar duas técnicas de extração de DNA, uma por detergente CTAB e outra por lise térmica. Foram utilizadas quatro cepas de L. monocytogenes, sendo uma ATCC 19117 e três isoladas de ambiente industrial (ralos de um frigorífico), previamente identificadas por métodos convencionais e confirmadas por métodos moleculares. A extração por lise térmica apresentou resultados satisfatórios, proporcionando a visualização de bandas visíveis e sem interferentes na reação de PCR. A lise térmica mostrou-se um bom protocolo de extração, pois além de fornecer DNA na quantidade e qualidade necessária para a amplificação, é uma técnica simples, rápida e barata. Palavras-chave: Métodos moleculares; microbiologia; detergente CTAB; lise térmica
Analítica
analitica Rebiun31233348 https://catalogo.rebiun.org/rebiun/record/Rebiun31233348 220822s2014 xx o 000 0 por d https://dialnet.unirioja.es/servlet/oaiart?codigo=5203711 (Revista) ISSN 1981-2965 S9M oai:dialnet.unirioja.es:ART0000841598 https://dialnet.unirioja.es/oai/OAIHandler 15 DGCNT S9M S9M dc Avaliação de protocolos de extração de DNA genômico na verificação da presença de Listeria monocytogenes por PCR electronic resource] 2014 application/pdf Open access content. Open access content star Listeria monocytogenes is a pathogen transmitted by foods that can cause serious illness, especially in immunocompromised individuals. The rapid and accurate identification of these bacteria in foods is a great ally in preventing its transmission. The molecular methods have proven to be effective for that; however, is still difficult to determine the optimal DNA extraction technique based on the characteristics of each microorganism. The efficiency of PCR depends on satisfactory amounts and quality of DNA. This study aimed to evaluate two DNA extraction techniques, CTAB detergent and thermal lysis. Four strains of L. monocytogenes were used, one ATCC 19117 and three isolated industrial environment (thinning of a slaughterhouse), previously identified by conventional methods and confirmed by molecular methods. The extraction by thermal lysis showed satisfactory results, providing visualization of visible bands and without interfering in the PCR reaction. The thermal lysis proved to be an adequate extraction protocol, as well as providing the amounts and quality of DNA required for the amplification, being simple, fast and an inexpensive technique Listeria monocytogenes é um patógeno transmitido por alimentos que pode causar sérias doenças, principalmente em indivíduos imunodeprimidos. A identificação rápida e precisa desta bactéria nos alimentos é uma grande aliada na prevenção da sua transmissão. Os métodos moleculares têm se mostrado efetivos no que se refere a estes quesitos, no entanto, ainda é difícil determinar a melhor técnica de extração do DNA em função das características de cada micro-organismo. A eficiência da PCR depende de DNA em quantidade e qualidade satisfatórios. O presente trabalho teve por objetivo avaliar duas técnicas de extração de DNA, uma por detergente CTAB e outra por lise térmica. Foram utilizadas quatro cepas de L. monocytogenes, sendo uma ATCC 19117 e três isoladas de ambiente industrial (ralos de um frigorífico), previamente identificadas por métodos convencionais e confirmadas por métodos moleculares. A extração por lise térmica apresentou resultados satisfatórios, proporcionando a visualização de bandas visíveis e sem interferentes na reação de PCR. A lise térmica mostrou-se um bom protocolo de extração, pois além de fornecer DNA na quantidade e qualidade necessária para a amplificação, é uma técnica simples, rápida e barata. Palavras-chave: Métodos moleculares; microbiologia; detergente CTAB; lise térmica LICENCIA DE USO: Los documentos a texto completo incluidos en Dialnet son de acceso libre y propiedad de sus autores y/o editores. Por tanto, cualquier acto de reproducción, distribución, comunicación pública y/o transformación total o parcial requiere el consentimiento expreso y escrito de aquéllos. Cualquier enlace al texto completo de estos documentos deberá hacerse a través de la URL oficial de éstos en Dialnet. Más información: https://dialnet.unirioja.es/info/derechosOAI | INTELLECTUAL PROPERTY RIGHTS STATEMENT: Full text documents hosted by Dialnet are protected by copyright and/or related rights. This digital object is accessible without charge, but its use is subject to the licensing conditions set by its authors or editors. Unless expressly stated otherwise in the licensing conditions, you are free to linking, browsing, printing and making a copy for your own personal purposes. All other acts of reproduction and communication to the public are subject to the licensing conditions expressed by editors and authors and require consent from them. Any link to this document should be made using its official URL in Dialnet. More info: https://dialnet.unirioja.es/info/derechosOAI Portuguese métodos moleculares microbiologia detergente CTAB lise térmica Molecular methods microbiology CTAB detergent thermal lysis text (article) Monteiro, Francielli Casanova. cre Montanhini, Maike Taís Maziero. cre Bittencourt, Juliana Vitoria Messias. cre Revista Brasileira de Higiene e Sanidade Animal: RBHSA, ISSN 1981-2965, Vol. 8, Nº. 4, 2014, pags. 141-156 Revista Brasileira de Higiene e Sanidade Animal: RBHSA, ISSN 1981-2965, Vol. 8, Nº. 4, 2014, pags. 141-156 Revista Brasileira de Higiene e Sanidade Animal: RBHSA, ISSN 1981-2965, Vol. 8, Nº. 4, 2014, pags. 141-156